Дети

Глубокий
анализ
Здоровья детей
Подробнее
Время
лечиться
Формы заболеваний
Подробнее
Итоги
лечения
Снова за учебу!
Подробнее

Анализ статуса метилирования

Однако в последнее время в качестве одной из причин возникновения опухоли наряду со структурными большое значение отводится эпигенетическим (функциональным) факторам регуляции генов (изменениям, не влияющим на нуклеотидную последовательность ДНК. но приводящим к - нарушению экспрессии гена). К таким повреждениям относят аномальное метилирование регуляторных элементов генов супрессоров. В результате аномального метилирования блокируется образование белковых продуктов, необходимых для нормальной регуляции клеточного цикла, процессов дифференцировки и апоптоза, что приводит к опухолевой трансформации клетки.

Анализ статуса метилирования проводили методом метил чувствительной полимеразой цепной реакции (МЧ-

ПЦР). Этот метод основан на избирательном гидролизе исследуемого участка ДНК и позволяет выявить единичные модифицированные нуклеотиды (метилцитозин) в цепи метилированной матрицы. Если фрагмент ДНК не содержит модифицированных оснований, то гидролиз происходит полностью и продукт не определяется, если же в сайте узнавания происходит модификация цитозина в метилцитозин, то гидролиза ДНК не происходит и на геле выявляется фрагмент определенной длины. Для проведения анализа метилирования промоторной области гена RB1 были использованы образцы ДНК из опухоли и лимфоцитов периферической крови 60 больных. В ходе проведенных работ метилирование промоторной области RB1 определено в 14 образцах опухоли (27 %), что выше данных, представленных в литературе (10 - 15 %). Аномальное метилирование сочеталось с ПГ в 10 образцах, с мутациями в гене - в 3 случаях; в одном случае мутационного события во втором аллели обнаружено не было. Почти в случаев спорадической РБ метилирование (в одном аллели), сочетаясь с ПГ и мутациями (в другом), приводило к развитию РБ Впервые удалось показать метилирование гена RB1 не только в опухоли, но и в геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови.

Таким образом, были установлены причины инактивации обоих аллелей гена в 54 из 60 случаев РБ. Еще в 3 случаях выявлено хотя бы одно мутационное событие в опухоли. Большой интерес вызвали три оставшихся случая (односторонняя спорадическая РБ), где никакой молекулярной патологии гена RB1 не выявлено. В связи с этим фактом возникла необходимость поиска дополнительных причин, приводящих к трансформации клетки.

03.12.2012